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医疗器械

慨括:医疗器械
内容梗概:医疗器械
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实验原理

本方法参考GB/T 16886.5:2017/ISO 10993-5:2009《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》,通过确定在琼脂糖凝胶中扩散后的细胞毒性来评估潜在刺激性。该试验用于细胞毒性定性评价,该方法不适用于不能通过琼脂层扩散的物质或与琼脂反应的物质。

目的:可以通过敲定在琼脂糖凝胶的作用中蔓延后的人体细胞致癌性来评价潜在的刺激作用性。

基本步骤:

L929细胞接种至培养皿中,维持培养24h至细胞近汇合80%以上。显微镜检查培养细胞的近汇合和形态学情况。弃去培养皿中的培养基,然后将融化琼脂琼与培养基混合配制所需比例,吸取一定体积至皿中。中性红染色约15~30min后弃去。然后将实验样品的平行试样小心地放在皿的固化琼脂层上。暴露24h后倒置显微镜下观察各组细胞形态及褪色情况,按下表进行评分。

评判标准:

在去除样品前后进行观察,倒置显微镜下观察并记录细胞形态变化,细胞形态异常包括一般形态变化、空泡、脱壁、溶解和膜完整性丧失。按表1进行细胞形态定性观察分级。按表2进行反应区域结果评判。

表1. 细胞核致毒状态学相关性分级a
分级管理 生殖细胞响应 肿瘤细胞体型定量分析形容

0

肿瘤肿瘤肿瘤细胞质内粒子离散,未表明肿瘤肿瘤肿瘤细胞融化,肿瘤肿瘤肿瘤细胞植物的生长未仰制。

1

稍微 <20%人体神经神经组织细胞变圆和松懈贴壁,人体神经神经组织细胞质内未发现了粉末物料限制或型态失常;偶有人体神经神经组织细胞消融;仅一些人体神经神经组织细胞成长能够抑制。

2

轻微 <50%体上皮体细胞系变圆,体上皮体细胞系质内粉末东西增多,的部分体上皮体细胞系溶化;<50%体上皮体细胞系产生阻止。

3

重度 <70%肿瘤神经肿瘤细胞变圆或溶水;肿瘤神经肿瘤细胞层尚末截然影响,>50%肿瘤神经肿瘤细胞生长的压制。

4

严峻 亲近完全或完全細胞层受损或細胞融解。
 
表2. 琼脂和滤膜散出并且或会交往表现定级
定级 細胞反响 不良反应描述英文

0

未显示坯料边上和留言板未查看到响应区域划分

1

试件正上方一系畸型或受损细胞膜

2

重度 的反应范围内仅受限于于试件下侧部分区域划分

3

轻中度 生理反应区域扩充至样品旁边1.0cm内

4

慢性 化学反应面积加密至试件边部>1.0cm
 

评分和判定标准按照GB/T 16886.5:2017/ISO 10993-5:2009《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》,如果根据表1和表2的评分>2时,认为具有细胞毒性效应。


实验原理

参考ISO 10993-5-2009(EN)《医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验》,利用体外细胞毒性试验-吉姆萨染色法了解样品体外细胞毒性。吉姆萨染液可将细胞核染成紫红色或蓝紫色,胞浆染成粉红色,在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。细胞染色情况根据倒置显微镜下观察的细胞状态进行评估,通常根据细胞的形态学、空泡、脱壁、溶解和膜完整性丧失等情形对细胞损伤情况进行评估。评分和判定标准按照国际ISO 10993-5-2009。

目的利用体外细胞毒性试验-吉姆萨染色法了解样品体外细胞毒性。

基本步骤

MRC-5细胞接种至96孔版,维持培养24h,形成半汇合单层。然后按照ISO 10993-12进行浸提液制备与样品浸提液的系列浓度实验化合物接触。暴露24h后进行吉姆萨染色,倒置显微镜下观察各组细胞形态,按下表进行评分,并采集相应图像。

评价标准

定性评价的记分方法见表1。

表1 细胞毒性记分方法

分级a 组织反應 细胞系形态特征相关性描绘
0 末见细胞系伤到
1 稍微 <20%人体细胞软组织损伤
2 轻微 <50%人体细胞直接损伤
3 中重度 <70%受损细胞拉伤
4 较为严重的 >70%上皮细胞板材损害
 

实验结果中,细胞毒性形态学分级大于2即可考虑受试物具有细胞毒性效应。如果实验中发现阴性对照组细胞出现细胞毒性效应和/或阳性对照组细胞未出现毒性效应,可认为该次实验数据不可靠。

 
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